二、人精子存活试验

人精子存活试验（human sperm survival assay，HSSA）是利用人类精子与供试品或其浸提液共孵育后精子活力的变化来间接判断受试物对精子、卵子或胚胎的潜在毒性。相较于鼠胚试验不宜在IVF实验室中常规开展，精子存活试验具有简单、易操作的优点，可作为常用的质控实验。

人精子存活试验所用精液应采自22～35岁健康男性。选用精液的标准是精液外观呈均质性、灰白色，正常精子形态率≥ 15%，30分钟内液化，pH ≥ 7.2，精液体积大于2ml，精子浓度≥ 20×10⁶/ml，精子活力（前向运动精子百分率）≥ 50%，且圆细胞浓度< 1×10⁶/ml。用至少3份来自不同供体的合格精液进行试验，试验要设立阴性对照组、阳性对照组、供试样品组。采用上游法制备供试精子样品，计数并评估其精子活力（精子活力为向前运动精子除以精子总数的百分数），做好记录。使用精子活力≥ 90%的样品离心重新悬浮，调整浓度至（5±2）×10⁶/ml，等量分3份分别加入阴性对照组、阳性对照组、供试样品组，在37℃继续培养24小时后，再次测定精子活力，计算精子活力系数（sperm motility index，SMI）。SMI =试验结束时精子活力/试验开始时精子活力；相对SMI=供试样品SMI/对照组SMI。试验结束时，阴性对照组精子SMI ≥ 0.7，且阳性对照组精子SMI < 0.6，认为该份精子有效。在三份有效试验中，若供试样品组两份样品的SMI ≥ 0.7，且相对SMI ≥ 0.9，则认为该样品对人类精子的影响可以忽略，反之则不可忽略。