一、鼠胚试验

胚胎培养实验室的环境温度、湿度，仪器设备的温度和性能，试剂耗材的质量等，是否能达到配子及胚胎体外操作和生长发育的要求至关重要。因此，在进行人类胚胎的体外操作和培养之前，要检测胚胎培养实验室的整个培养体系能否胜任体外胚胎培养的重任。鼠胚试验是检测胚胎培养实验室的培养体系是否符合人类胚胎体外培养要求的标准方法之一。但检测前提，是假设鼠胚和人类胚胎体外培养对培养体系的需求相同。但应注意的是，小鼠胚胎与人类胚胎发育略有不同（表1-2）。例如小鼠胚胎在2细胞末期之前内源性代谢并不活跃。因此，鼠胚试验成功与否与小鼠品系、测定开始的阶段（1细胞或2细胞期受精卵）、培养条件、是否在严格控制和可重复的程序下执行，均有关联。例如：远亲杂交鼠胚在特定培养液中可能停滞于2细胞期；1细胞期受精卵鼠胚对培养环境的毒素更加敏感；是否添加氨基酸和白蛋白也可能影响鼠胚试验的敏感性。因此理想的状态，是从近亲杂交鼠1细胞期受精卵开始，在不含氨基酸的简单培养液中加入白蛋白，将其从1细胞期受精卵培养到2细胞期后，在不含白蛋白的简单培养液中继续培养至囊胚期。

鼠胚试验应选择对检测胚胎毒性足够敏感且稳定的品系，在严格控制可重复的程序下执行。设立对照组和质控组，如对新培养皿进行质控，用已质控合格的相同批号的卵裂液放入已质控合格的旧皿作为对照组；用已质控合格的相同批号的卵裂液放入将要质控的新皿作为质控组。根据受精方式不同，鼠胚试验可分为小鼠体外受精胚培养和小鼠体内受精胚的体外培养。有专家提示尽管体外受精的方式操作起来难度较大，但其较体内受精更为敏感，更适合对新建中心和新设备进行质控。但无论是何种受精方式，前期超促排的试验程序应一致：不同品系的小鼠最佳超排年龄不同，应选择合适周龄雌鼠（一般选择3～4周龄雌鼠，对于某些品系，如FVB/BALB/c，也可选择6～8周龄雌鼠），经腹腔注射孕马血清促性腺激素（pregnant mare’s serum gonadotropin，PMSG）10IU/只，48小时后经腹腔注射人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，hCG）10IU/只。如进行体内受精则在注射hCG当日将雌鼠与同品系性成熟雄鼠1：2合笼过夜，第二天早上检查交配情况，选择见栓小鼠备用。注射hCG 18～22小时后处死见栓雌鼠，可在输卵管壶腹部收集到1细胞胚胎，并将其转移至预热好的透明质酸酶中，卵丘及颗粒细胞消化完毕后立即进行转移、清洗、挑选，进一步培养观察；注射hCG 40～48小时后处死见栓雌鼠，即可得到2细胞胚胎，经冲洗后培养观察。如进行体外受精则在注射hCG 13～16小时后处死雌鼠，用1ml注射器针头切开挤出小鼠输卵管壶腹部的卵子复合体。处死雄鼠后，在附睾及输精管打孔使精子游出，处理计数后，将精卵放入受精皿使两者结合成受精卵用于进一步观察。分别观察胚胎的卵裂情况及囊胚形成情况，可接受准则是囊胚形成率≥ 80%。若不合格，则不能使用，需重新质控；若仍不合格应及时反馈代理商，退还不合格耗材。